1-3第三节本节主要内容一.中药有效成分的提取二、中药有效成分的分离与精制（一）根据物质溶解度差别进行分离（二）根据物质在两相溶剂中的分配系数不同进行分离（三）色谱分离法一、中药有效成分的提取提取前的准备1、考查药材的学名、产地、药用部位、采集时间和方法2、查阅文献——利用前人的提取分离经验3、未知成分——化学成分系统预试验中药有效成分的提取方法提取法溶剂法——相似相溶原理（重点）水蒸气蒸馏法——适于挥发性成分超临界流体萃取法——适于多种物质，尤其是低级性、挥发性成分。溶剂法1、溶剂类型亲水性溶剂—MeOHEtOHMe2CO中等极性溶剂——n-BuOHEtOAC亲脂性溶剂——Et2OpetCHCL3C6H6提取范围pet油脂、蜡、叶绿素、游离甾体及三萜类CHCL3EtOAC——游离生物碱、有机酸、黄酮MeOHEtOHMe2CO——苷类、生物碱盐、及鞣质类常用提取方法（1）浸渍法适于对热不稳定成分（提取率不高）（2）渗滤法优于（1）法，但溶剂用量大（3）煎煮法，不适于对热不稳定的成分及挥发油成分（4）回流提取法适于用有机溶剂提（5）连续回流提取法用索氏提取器提，溶剂用量少，提取率高（二）水蒸汽蒸馏法此法适于挥发性成分的提取。（三）超临界流体萃取法（SFE）是一种集提取与分离于一体，又基本上不用有机溶剂的新技术。超临界流体是一种处于临界温度和临界压力以上，介于气体和液体之间的流体，具有很强的溶解能力，适于对很多物质的提取。二、中药有效成分的分离与精制（一）根据物质溶解度差别进行分离结晶、重结晶法原理利用温度不同引起溶解度的改变进行分离溶剂选择对纯化成分——冷热都不溶或冷热都溶沸点不可太高，易于回收（n-BuOH不适合b.p太高）对纯化成分不反应（2）结晶纯度的检查1、外观：颜色、晶型2、mp检查溶点、溶距3、TLC三种不同溶剂系统均为一个斑点4、HPLC——基线）结晶制备操作关键：溶解趁热抽滤沉淀（热不溶型杂质）滤液（冷热都不溶杂质）母液结晶2、沉淀法（溶剂沉淀）原理——改变混合溶剂极性使一部分成分沉淀分类去除多糖、蛋白质等水溶性杂质除去树脂、叶绿素等亲脂性杂质3.醇提醚（丙酮）沉淀法——可沉淀皂苷提取酚酸性成分：黄酮、蒽醌等原理离子态溶解，分子态难溶而沉淀析出金属盐沉淀法酸性物——可用Ca++Ba++Pb++等沉淀碱性物苦味酸盐沉淀雷氏铵盐沉淀中性Pb(AC)2可沉淀COOH，邻二酚羟基Pb++碱性Pb(OH)AC再加使单酚羟基或多元醇沉淀（二）根据物质在两相溶剂中的分配系数不同进行分离1）、液—液萃取与分配系数KD值原理——利用混合物中各成分在两种互不相溶的溶剂中分配系数的不同而达到分离的方法Cu（有机溶剂）上相KDCL(水层)下相例如两物质KA=10KB=0.1CHCL3H2O上层（H2O）下层（CHCL3体积比：1：1萃取平衡后KA=100.110此萃取率说明如下：大部分在上层（90％）仅10％在下层——氯仿层B大部分在下层（90％在氯仿层）仅10％在上层——水层因此一次萃取可基本分离开2）、分离难易与分离因子表示分离的难易程度定义——被分离两物质在同一溶剂系统中分配系数的比值10：0.1＝100（一次萃取可完成）10：1＝10（10～12次萃取可完成）（无法分离）3）、分配比与pH对酸碱两性化合物的影响（1）酸性物质（分子态）HAH3O+（离子态）完全解离时PH完全游离时PH所以酸性物PH（分子态；离子态（盐）游离态）PH加酸)同理：碱性物PH(加酸)（分子态；离子态游离态）PH酸性物为HA一般情况PH碱性物为BH+酸性物为酸性物质Pka酸性强Pka酸性弱碱性物质Pka小碱性弱Pka大碱性强萃取操作注意问题必须是互不相容的两相溶剂注意温度浓度对KD值的影响注意事项防止乳化破乳方法抽滤，加热，冷冻长时间放置加入破乳剂5）可进行两相溶剂萃取的组合水——石油醚水——水——己烷水——氯仿水——乙酸乙酯水——正丁醇不可进行萃取的溶剂组合水——乙醇水——甲醇水——丙酮乙醇——氯仿甲醇——乙酸乙酯6）液滴逆流色谱(DCCC)及高速逆流色谱(HSCCC)1．分离度大大提高（无载体）特点2．可克服固体载体的吸附消耗3．不会使样品形变污染和色谱峰畸形拖尾分离对象皂苷，生物碱，蛋白质，糖类，酸性化合物等难分离的成分液滴逆流分配法、其他方法（1）分馏法——利用被分离物各成分沸点的不同进行分离。（2）膜分离法——小分子可通过生物膜，大分子通不过，适于多糖、肽及蛋白质大分子的精制。（3）升华法——适于有升华性的成分的分离。（三）色谱分离法1、定义——利用混合物中各成分对固定相和移动相的亲和力的差异使之相互分离的方法，又称层析法或色层法。这是一种物理化学分离、分析技术。2、作用——可用于混合物的分离，又可用于化合物的定性检识和定量分析。《一》色谱法分类【1】按分离原理分：离子交换树脂色谱法【2】按操作方法分1、柱层析——用于样品分离、精制2、薄层层析（TLC）——定性、定量3、纸色谱（PC）——定性、定量【3】按两相状态分1、液－固色谱2、液－液色谱3、气－固色谱4、气－液色谱【一】吸附色谱极性吸附剂—硅胶，氧化铝分类非极性吸附剂—活性炭2、吸附规律—总原则为相似者易于吸附极性吸附层析—极性强者易吸附非极性吸附层析—对非极性物质吸附牢极性层析法分离规律1）吸附规律——被分离物极性越强，吸附越牢，极性越弱，吸附越弱。2）分离规律:TLC:极性强的吸附牢，展开距离短，Rf值小极性弱的吸附弱，展开距离长，Rf值大柱层析极性强的吸附牢，洗脱速度慢，后洗下极性弱的吸附弱，洗脱速度快，先洗下3、极性强弱的判断（1）极性的概念—表示分子中电荷不对称程度分子偶极矩—越大者，极性越强相关因素分子极化度—越强者，极性越强介电常数ε—ε越大，极性越强（2）常见有机官能团极性顺序:-CH2-CH2-COOH(3)常见有机溶剂极性顺序与εpetC6H6Et2OEtOAcEtoAC20.7）EtOHMeOHH2O(4)比较原则a）官能团种类——母核相同按官能团极性顺序排列b）官能团数目——极性官能团多者，分子极性强c）官能团排列——易形成分子内氢键者和有空间位阻者,极性官能团的极性下降。比值判断，比值高者，极性小，比值小者，极性大。（经验法）硅胶、氧化铝与活性炭吸附规律的差异1、硅胶、氧化铝对极性物质吸附牢活性炭相反对非极性物质吸附牢。（但对于芳香族吸附大于脂肪族）2、同系物：硅胶、氧化铝——分子量小的吸附牢活性炭分子量大的吸附牢3、溶剂介质影响：硅胶、氧化铝在水中活性下降活性炭在水中吸附性提高